Solution saline tamponnée au phosphate ou solution de PBS
Share
Le PBS ou la solution saline tamponnée au phosphate est une solution tampon particulièrement intéressante car elle imite la concentration ionique, l'osmolarité et le pH des fluides corporels humains. En d'autres termes, il est isotonique aux solutions humaines, il est donc moins susceptible de causer des dommages cellulaires, de la toxicité ou des précipitations indésirables dans la recherche biologique, médicale ou biochimique.
Composition chimique du PBS
Il existe plusieurs recettes pour préparer une solution PBS. La solution essentielle contient de l'eau, de l'hydrogénophosphate de sodium et du chlorure de sodium. Certaines préparations contiennent du chlorure de potassium et du dihydrogénophosphate de potassium. L'EDTA peut également être ajouté dans une préparation cellulaire pour éviter l'agglutination.
La solution saline tamponnée au phosphate n'est pas idéale pour une utilisation dans des solutions contenant des cations divalents (Fe2+, Zn2+) car des précipitations peuvent survenir. Cependant, certaines solutions de PBS contiennent du calcium ou du magnésium. Gardez également à l'esprit que le phosphate peut inhiber les réactions enzymatiques. Soyez particulièrement conscient de cet inconvénient potentiel lorsque vous travaillez avec de l'ADN. Bien que le PBS soit excellent pour la science physiologique, sachez que le phosphate dans un échantillon tamponné au PBS peut précipiter si l'échantillon est mélangé avec de l'éthanol.
Une composition chimique typique de PBS 1X a une concentration finale de 10 mM PO43−, 137 mM de NaCl et 2,7 mM de KCl. Voici la concentration finale de réactifs dans la solution:
| Sel | Concentration (mmol / L) | Concentration (g / L) |
|---|---|---|
| NaCl | 137 | 8.0 |
| KCl | 2.7 | 0,2 |
| N / a2HPO4 | dix | 1,42 |
| KH2PO4 | 1,8 | 0,24 |
Protocole de fabrication de solution saline tamponnée au phosphate
Selon votre objectif, vous pouvez préparer du PBS 1X, 5X ou 10X. Beaucoup de gens achètent simplement des comprimés tampons PBS, les dissolvent dans de l'eau distillée et ajustent le pH au besoin avec de l'acide chlorhydrique ou de l'hydroxyde de sodium. Cependant, il est facile de créer la solution à partir de zéro. Voici des recettes de solution saline tamponnée au phosphate 1X et 10X:
Réactif | Montant ajouter (1 ×) | Concentration finale (1 ×) | Montant à ajouter (10 ×) | Concentration finale (10 ×) |
| NaCl | 8 g | 137 mM | 80 g | 1,37 M |
| KCl | 0,2 g | 2,7 mM | 2 g | 27 mM |
| Na2HPO4 | 1,44 g | 10 mM | 14,4 g | 100 mM |
| KH2PO4 | 0,24 g | 1,8 mM | 2,4 g | 18 mM |
Optionnel: | ||||
| CaCl2 • 2H2O | 0,133 g | 1 mM | 1,33 g | 10 mM |
MgCl2 • 6H2O | 0,10 g | 0,5 mM | 1,0 g | 5 mM |
- Dissoudre les sels réactifs dans 800 ml d'eau distillée.
- Ajustez le pH au niveau souhaité avec de l'acide chlorhydrique. Il s'agit généralement de 7.4 ou 7.2. Utilisez un pH-mètre pour mesurer le pH, pas du papier pH ou toute autre technique imprécise.
- Ajouter de l'eau distillée pour atteindre un volume final de 1 litre.
Stérilisation et stockage de la solution PBS
La stérilisation n'est pas nécessaire pour certaines applications, mais si vous la stérilisez, distribuez la solution en aliquotes et autoclave pendant 20 minutes à 15 psi (1,05 kg / cm2) ou utiliser la stérilisation par filtre.
Une solution saline tamponnée au phosphate peut être conservée à température ambiante. Il peut également être réfrigéré, mais une solution 5X et 10X peut précipiter lorsqu'elle est refroidie. Si vous devez refroidir une solution concentrée, conservez-la d'abord à température ambiante jusqu'à ce que vous soyez certain que les sels se sont complètement dissous. En cas de précipitation, le réchauffement de la température les ramènera en solution. La durée de conservation de la solution réfrigérée est de 1 mois.
Diluer une solution 10X pour fabriquer du PBS 1X
10X est une solution concentrée ou mère, qui peut être diluée pour faire une solution 1X ou normale. Une solution 5X doit être diluée 5 fois pour faire une dilution normale, tandis qu'une solution 10X doit être diluée 10 fois.
Pour préparer une solution de travail de 1 litre de PBS 1X à partir d'une solution de PBS 10X, ajoutez 100 ml de la solution 10X à 900 ml d'eau. Cela ne fait que modifier la concentration de la solution, pas la quantité en grammes ou molaire des réactifs. Le pH ne doit pas être affecté.
PBS contre DPBS
Une autre solution tampon populaire est la solution saline tamponnée au phosphate de Dulbecco ou DPBS. Le DPBS, comme le PBS, est utilisé pour la recherche biologique et les tampons dans la plage de pH de 7,2 à 7,6. Il peut être conservé à température ambiante. La solution de Dulbecco contient une concentration plus faible de phosphate. Il s'agit de 8,1 mM d'ions phosphate mM, tandis que le PBS ordinaire est de 10 mM phosphate. La recette pour 1x DPBS est:
| Réactif | Montant à ajouter (1x) |
| NaCl | 8,007 g |
| KCl | 0,201 g |
| N / a2HPO4 | 1.150 g |
| KH2PO4 | 0,200 g |
| Optionnel: | |
| CaCl2• 2H2O | 0,133 g |
| MgCl2• 6H2O | 0,102 g |
